酶聯(lián)生物免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中的ELISA試劑盒，有著靈敏度高、特異性強(qiáng)、經(jīng)濟(jì)性較好等優(yōu)點(diǎn)，酶聯(lián)生物的ELISA試劑盒在所有產(chǎn)品中銷(xiāo)量是高的，本公司ELISA試劑盒僅用于科研，不用于臨床。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中肯定會(huì)有很多科研朋友是不懂的，今天就給大家介紹一下ELISA試劑盒的使用方法。
一：實(shí)驗(yàn)操作程序簡(jiǎn)述
1. 準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品；
2. 加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)30分鐘；
3. 洗板5次，加入顯色液A、B，37℃反應(yīng)10分鐘；
4. 加入終止液；
5. 15分鐘之內(nèi)度OD值；
二：包被的條件
包被用抗原或抗體的濃度，包被的溫度和時(shí)間，包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)的特點(diǎn)和材料的性質(zhì)而選定。ELISA試劑盒抗體和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。
通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置放置一個(gè)晚上，37℃中保溫2小時(shí)被認(rèn)為具有同等的包被效果。包被的適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化，每批材料需通過(guò)實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。
三：競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測(cè)定多用此法。
四：抗原和抗體
制備結(jié)合物時(shí)所用抗體一般 均為純度較高的IgG，以免在與酶聯(lián)結(jié)時(shí)其他雜蛋白的干擾。用親和層析純的抗體，這樣全部酶結(jié)合物均具有特異的免疫活性，可以在高稀釋度進(jìn)行反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果本底淺淡。如用F(ab')2進(jìn)行標(biāo)記，則更可避免標(biāo)本中RF的干擾。
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